本發(fā)明涉及酶聯(lián)免疫檢測領(lǐng)域，公開了一種檢測克倫特羅酶聯(lián)免疫試劑盒及其檢測方法與檢測前動(dòng)物組織的制樣方法。本發(fā)明的檢測克倫特羅的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括盒體、96/40孔酶標(biāo)板，辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體、克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液、底物液、底物緩沖液和反應(yīng)終止液；所述96/40孔酶標(biāo)板孔內(nèi)包被有能與抗克倫特羅抗體特異結(jié)合的包被抗原。本試劑盒采用直接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù)，大大簡化了操作步驟和反應(yīng)時(shí)間，減少了因操作復(fù)雜引起的誤差，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本發(fā)明的檢測前動(dòng)物組織制樣方法，操作簡便，損失小，時(shí)間短，成本極低，其提取樣品可直接用于酶聯(lián)免疫方法、金標(biāo)免疫層析等免疫方法的測定，也可作為儀器分析前期處理的樣品。

1.一種檢測克倫特羅的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括盒體、酶標(biāo)板，其特征在于還包括辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體、克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液、底物液、底物緩沖液和反應(yīng)終止液；所述酶標(biāo)板孔內(nèi)包被有能與抗克倫特羅抗體特異結(jié)合的包被抗原；所述酶標(biāo)板是96/40孔酶標(biāo)板；所述辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體為抗克倫特羅多克隆抗體、單克隆抗體或基因工程抗體；所述底物液為含有過氧化氫或過氧化脲的pH5.0磷酸-檸檬酸緩沖溶液；所述底物緩沖液為含有3，3，5，5-四甲基聯(lián)苯胺或鄰苯二胺的pH5.0磷酸-檸檬酸緩沖溶液；所述終止液為1mol/L硫酸溶液。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)板是聚苯乙烯微孔板，包被有能與抗克倫特羅抗體特異結(jié)合的包被抗原，并封閉微孔表面未吸附位點(diǎn)。3.利用權(quán)利要求1所述酶聯(lián)免疫試劑盒檢測克倫特羅的方法，其特征在于包括如下步驟：(1)做標(biāo)準(zhǔn)和樣品兩個(gè)平行檢測，在標(biāo)準(zhǔn)品孔加入標(biāo)準(zhǔn)品，樣品孔加入待測樣品，然后每孔加入酶標(biāo)記物，輕拍混勻，室溫孵育；(2)倒出酶標(biāo)板孔內(nèi)中的液體，并清洗干凈；(3)每孔加入底物緩沖液與底物液的等體積混合液，輕拍混勻，暗處室溫孵育；(4)加入反應(yīng)終止液到孔中，混合均勻，在波長450或492nm下，以空氣為空白，測定各孔吸光值，在加入終止液后60min內(nèi)讀取吸光值；(5)以所獲樣品吸光值的平均值計(jì)算抑制率，以抑制率為縱坐標(biāo)，克倫特羅濃度的半對數(shù)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出直線方程，根據(jù)方程式求出對應(yīng)樣品的克倫特羅濃度；所述抑制率的計(jì)算式為：其中，Amax為不加克倫特羅時(shí)的吸光值，Ax為克倫特羅濃度為x時(shí)的吸光值，Amin為空白對照孔的吸光值。