本發(fā)明公開了一種基于核酸適體的熒光檢測試劑盒，包括核酸外切酶Ⅲ，反應(yīng)緩沖液，DNA1、DNA2和莖環(huán)結(jié)構(gòu)核酸H1。使用核酸適體為分子識(shí)別元件進(jìn)行特異性識(shí)別，形成具有平末端的3'雙鏈核酸結(jié)構(gòu)，加入核酸外切酶Ⅲ后進(jìn)行循環(huán)信號(hào)擴(kuò)增，從而使大量的雙鏈DNA變成單鏈DNA，加入熒光染料后，通過區(qū)分熒光強(qiáng)度變化檢測待測分子含量。該發(fā)明對馬拉硫磷檢測的線性范圍為10pM到100nM，檢測限為5pM，同時(shí)檢測體系具有很好的特異性，常見其他類似物不會(huì)干擾檢測結(jié)果。檢測過程無需分離純化過程，簡單混合即可檢測，具有操作簡單，成本低廉，響應(yīng)迅速等優(yōu)點(diǎn)，可用于食品、水源、土壤等樣品中農(nóng)藥殘留的快速高靈敏檢測。

1.一種基于核酸適體的熒光檢測試劑盒，包括核酸外切酶Ⅲ，反應(yīng)緩沖液，DNA1、DNA2和莖環(huán)結(jié)構(gòu)核酸H1，其中：DNA1為待測分子的核酸適體；DNA2可與所述DNA1部分序列連續(xù)互補(bǔ)，互補(bǔ)配對后DNA2的3’末端具有凸起，DNA1的3’端具有凸起；H1依次由a、b、c、b*以及d五個(gè)部分組成，所述a部分為5'端凸起，H1的a部分可與DNA2的3’端部分互補(bǔ)配對形成雙鏈DNA，并在DNA2的3’端形成凸起；d部分為3'端凸起，b及b*部分互補(bǔ)形成H1莖環(huán)結(jié)構(gòu)的莖，c部分為H1莖環(huán)結(jié)構(gòu)的環(huán)；d部分可與DNA2的5'端部分互補(bǔ)配對形成雙鏈DNA，并在H1的3’端形成3'平末端或3'凹陷末端；其中，DNA1、DNA2和H1的序列如下：DNA1：5'-ATCCGTCACACCTGCTCTTATACACAATTGTTTTTCTCTTAACTTCTTGACTGCTGGTGTTGGCTCCCGTAT-3'；H1：5'-CAATTGTTT-GCTTACGGT-ATACCTACGTCGATCGCA-ACCGTAAGC-TTCTCTTAACTT-3'。2.一種馬拉硫磷殘留檢測試劑盒，包括：(1)核酸DNA1、DNA2、莖環(huán)結(jié)構(gòu)核酸H1，其序列如下：馬拉硫磷適體DNA1：5'-ATCCGTCACACCTGCTCTTATACACAATTGTTTTTCTCTTAACTTCTTGACTGCTGGTGTTGGCTCCCGTAT-3'；DNA2：5'-AAGTTAAGAGAAAAACAATTGACACAC-3'；H1：5'-CAATTGTTT-GCTTACGGT-ATACCTACGTCGATCGCA-ACCGTAAGC-TTCTCTTAACTT-3'；(2)核酸外切酶Ⅲ(3)馬拉硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液(4)反應(yīng)緩沖液，含15mMTris-HCl，50mMNaCl，10mM MgCl₂,pH 7.0。