本公開內(nèi)容提供了用于使血液樣品成像的方法以及用于實(shí)施所述方法的試劑盒與系統(tǒng)。方法包括將包括紅細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液引入到載體的基底表面上，所述載體具有大于或等于當(dāng)在所述基底載體上時(shí)所述細(xì)胞懸浮液的垂直深度(h)的垂直高度(H)，所述細(xì)胞懸浮液包括通過定義的函數(shù)確定的細(xì)胞濃度(C)；使在細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞(不在其上施加任何力)沉降到載體的所述基底表面上以在載體的基底表面上形成細(xì)胞單層；以及獲取細(xì)胞單層的至少一部分的至少一幅顯微圖像；其中通過設(shè)置為不大于沉降在所述基底表面上時(shí)細(xì)胞懸浮液的垂直高度的20％的景深(DOF)的顯微鏡獲得所述至少一幅顯微圖像。

1.一種用于使血液樣品成像的方法，所述方法包括：
-將包括紅細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液引入到載體的基底表面上，所述載體具有大于或等于當(dāng)
在所述基底表面上時(shí)所述細(xì)胞懸浮液的垂直高度h的垂直高度H；
-使所述細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞沉降在所述載體的所述基底表面上以在所述載體的基底
表面上形成細(xì)胞單層，所述細(xì)胞懸浮液具有濃度C，所述濃度C是這樣的，當(dāng)使所述細(xì)胞懸浮
液中基本上所有的細(xì)胞沉降在所述載體的所述基底表面上以形成所述細(xì)胞單層時(shí)，在所述
基底表面上形成單層而在細(xì)胞間基本上無重疊；以及
-獲取所述細(xì)胞單層的至少一部分的至少一幅顯微圖像，
其中，通過設(shè)置為不超過當(dāng)沉降到所述基底表面上時(shí)所述細(xì)胞懸浮液的垂直高度的
20％的景深的顯微鏡獲得所述至少一幅顯微圖像。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述垂直高度h在20μm與1000μm之間。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中通過設(shè)置為不大于當(dāng)沉降在所述基底表面上時(shí)所述
細(xì)胞懸浮液的垂直高度的15％的景深的顯微鏡獲得所述至少一幅顯微圖像。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述景深在0.5μm與10μm之間。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述景深在0.5μm與5μm之間。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)胞是人細(xì)胞。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)胞包括至少50％紅細(xì)胞。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)胞包括至少75％紅細(xì)胞。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，包括以稀釋因子D稀釋包括所述紅細(xì)胞的樣品以獲得所述
細(xì)胞懸浮液，所述稀釋因子D是稀釋前每一ml細(xì)胞的濃度C₀與所述濃度C的函數(shù)。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中通過以下函數(shù)確定所述稀釋因子D：
11.如權(quán)利要求9所述的方法，其中樣品是血液樣品且所述稀釋因子D在50與300之間。
12.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述稀釋因子D在75與200之間。
13.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述稀釋因子D為約100。
14.如權(quán)利要求1所述的方法，包括通過稀釋包括紅細(xì)胞的血液樣品生成所述細(xì)胞懸浮
液以獲得所述細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞濃度C，使得在沉降到所述基底表面上后，細(xì)胞的密度在
10,000至30,000個(gè)細(xì)胞/mm²之間。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，所述稀釋包括使所述細(xì)胞懸浮液形成為具有在0.4與
0.9之間的平均基底表面覆蓋度的單層。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述平均基底表面覆蓋度在0.4與0.6之間。
17.如權(quán)利要求1所述的方法，包括選擇提供所述景深的顯微鏡物鏡透鏡，其中所述透
鏡允許獲取在其任一維度不大于3μm長(zhǎng)的至少一個(gè)物體的圖像。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述透鏡允許獲取具有相對(duì)于所述基底表面不大
于3μm的高度的至少一個(gè)物體的圖像。
19.如權(quán)利要求1所述的方法，包括分析所述至少一幅圖像以基于所述至少一幅圖像確
定所述細(xì)胞懸浮液中病原體的存在或不存在。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中所述細(xì)胞的至少一部分感染了病原體。
21.如權(quán)利要求19所述的方法，其中所述病原體是寄生蟲。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述寄生蟲是血液感染原生動(dòng)物。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述血液感染原生動(dòng)物選自由錐蟲屬
(Trypanosoma)、瘧原蟲屬(Plasmodium)、弓形蟲屬(Toxoplasma)和巴貝蟲屬(Babesi)組成
的屬。
24.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述血液感染原生動(dòng)物是選自由惡性瘧原蟲
(P.falciparum)、間日瘧原蟲(P.vivax)、卵形瘧原蟲(P.ovale)、三日瘧原蟲(P.malariae)
和諾氏瘧原蟲(P.knowlesi)組成的組的瘧原蟲。
25.如權(quán)利要求1所述的方法，包括應(yīng)用所述載體中的至少部分上部表面，將所述至少
部分上部表面放置在預(yù)期的垂直高度h。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，還包括在上部表面和所述至少部分表面之間放置一個(gè)
或更多個(gè)間隔物。
27.如權(quán)利要求1所述的方法，包括在將所述細(xì)胞懸浮液引入到所述載體上之前、在使
所述細(xì)胞沉降之前或在獲取所述至少一幅顯微圖像之前將所述細(xì)胞與一種或更多種染色
劑混合。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述一種或更多種染色劑的至少一種是熒光染色
劑且其中所述至少一幅顯微圖像包括用于檢測(cè)使用所述熒光染色劑染色的熒光圖像。
29.如權(quán)利要求1所述的方法，包括使所述細(xì)胞以每μm垂直高度h約1秒鐘的時(shí)間段沉降
在所述基底表面上藉以形成所述單層。
30.如權(quán)利要求1所述的方法，包括允許用于所述細(xì)胞沉降在所述基底表面上作為單層
的少于5分鐘的時(shí)間段。
31.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)胞懸浮液的所述垂直高度h在20μm和1000μm
之間。
32.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述垂直高度H在20μm至300μm之間。
33.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)胞懸浮液的所述垂直高度h在20μm和300μm之
間。
34.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)胞懸浮液的所述垂直高度h在20μm和250μm之
間。
35.如權(quán)利要求1所述的方法，包括獲取多幅顯微圖像，所述多幅顯微圖像的至少兩幅
在不同的條件下提供，所述條件包括使所述基底表面的不同部分成像和不同的照射條件。
36.一種試劑盒，所述試劑盒包括：
-載體，所述載體包括基底表面，所述載體具有垂直高度H；以及
-用于執(zhí)行以下步驟的使用說明：
-從包括紅細(xì)胞的血液樣品提供細(xì)胞懸浮液，所述細(xì)胞懸浮液具有細(xì)胞濃度C；
-將所述濃度C的細(xì)胞懸浮液引入到所述載體的基底表面上，當(dāng)在所述載體中時(shí)所述細(xì)
胞懸浮液具有所述垂直高度h，所述垂直高度h小于或等于所述垂直高度H；
-使所述細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞沉降到所述載體的所述基底表面上以在所述基底表面上
形成細(xì)胞單層，細(xì)胞濃度C是這樣的，當(dāng)使所述細(xì)胞懸浮液中基本上所有的細(xì)胞沉降到所述
載體的所述基底表面上以形成所述細(xì)胞單層時(shí)，在所述基底表面上形成單層而在細(xì)胞間基
本上無重疊；
-獲取所述細(xì)胞單層的至少一部分的至少一幅顯微圖像，
其中通過將顯微鏡設(shè)置為不超過當(dāng)沉降到所述基底表面上時(shí)所述細(xì)胞懸浮液的垂直
高度的20％的景深獲得所述至少一幅顯微圖像。
37.如權(quán)利要求36所述的試劑盒，其中所述使用說明用于執(zhí)行如權(quán)利要求1至35中任一
項(xiàng)所述的方法。
38.一種用于使血液樣品成像的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：
-一個(gè)或更多個(gè)容器單元，所述一個(gè)或更多個(gè)容器單元用于分別容納包括至少一種血
細(xì)胞稀釋劑的一種或更多種樣品處理劑；
-血液樣品制備單元，所述血液樣品制備單元與所述一個(gè)或更多個(gè)容器單元流體連通
且被配置為接收包括紅細(xì)胞的血液樣品及至少一種血細(xì)胞稀釋劑的用量并由此形成血細(xì)
胞懸浮液，所述至少一種細(xì)胞稀釋劑的用量確定為以稀釋因子D稀釋所述血液樣品以便提
供細(xì)胞濃度C；
-載體，包括基底表面，所述載體被配置為攜載所述血細(xì)胞懸浮液，并且所述載體具有
被配置為大于或等于當(dāng)在所述基底表面上時(shí)所述細(xì)胞懸浮液的垂直高度h的垂直高度H；
-顯微圖像獲取單元，所述顯微圖像獲取單元用于獲取當(dāng)在所述載體的所述基底表面
上時(shí)所述血細(xì)胞懸浮液的至少一幅圖像；
-控制單元，所述控制單元被配置為：
-提供稀釋所述血液樣品的稀釋因子D，因子D是預(yù)期的基底表面覆蓋度F、細(xì)胞血細(xì)胞
的平均細(xì)胞尺寸d和所述血細(xì)胞懸浮液的所述垂直高度h的函數(shù)，稀釋因子D提供當(dāng)使所述
細(xì)胞懸浮液中基本上所有的細(xì)胞沉降時(shí)，在所述載體的所述基底表面上形成細(xì)胞單層而在
細(xì)胞間基本上無重疊；以及
-通過所述顯微圖像獲取單元獲取所述血液細(xì)胞懸浮液的至少一幅顯微圖像，所述顯
微圖像獲取單元被設(shè)置為不大于當(dāng)沉降到所述基底表面上時(shí)所述血液細(xì)胞懸浮液的垂直
高度的20％的景深。
39.如權(quán)利要求38所述的系統(tǒng)，其中所述一種或更多種樣品處理劑包括一種或更多種
染色劑。
40.如權(quán)利要求39所述的系統(tǒng)，其中所述至少一種血液細(xì)胞稀釋劑的至少一種包括所
述一種或更多種染色劑。
41.如權(quán)利要求40所述的系統(tǒng)，其中至少一種染色劑是熒光染色劑。
42.如權(quán)利要求41所述的系統(tǒng)，其中所述至少一種染色劑選自由吖啶橙、赫希斯特家
族、分子信標(biāo)、Sytox或4',6-二脒基-2-苯基吲哚組成的組。
43.如權(quán)利要求38所述的系統(tǒng)，包括流體抽取機(jī)構(gòu)，所述流體抽取機(jī)構(gòu)用于從血液來源
抽取血細(xì)胞的樣品以及將所述血細(xì)胞的樣品引入所述血液樣品制備單元。
44.如權(quán)利要求38所述的系統(tǒng)，包括細(xì)胞計(jì)數(shù)單元，所述細(xì)胞計(jì)數(shù)單元用于計(jì)數(shù)由所述
血液樣品制備單元接收的細(xì)胞。
45.如權(quán)利要求38所述的系統(tǒng)，其中所述血液樣品制備單元包括攪拌單元，所述攪拌單
元被配置為使所述血液細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞均勻地分布。
46.如權(quán)利要求38所述的系統(tǒng)，包括輸出端口，所述輸出端口用于輸出所述至少一幅顯
微圖像或與所述至少一幅顯微圖像對(duì)應(yīng)的數(shù)據(jù)。
47.如權(quán)利要求38所述的系統(tǒng)，包括存儲(chǔ)單元，所述存儲(chǔ)單元通過所述控制單元可訪問
并包括指示一個(gè)或更多個(gè)輸入?yún)?shù)的數(shù)據(jù)。
48.如權(quán)利要求47所述的系統(tǒng)，其中所述數(shù)據(jù)還包括用于一個(gè)或更多個(gè)輸入?yún)?shù)的所
述血液樣品中的細(xì)胞類型并且所述數(shù)據(jù)通過所述控制單元可訪問。
49.如權(quán)利要求38所述的系統(tǒng)，包括處理器，所述處理器被配置為分析所述至少一幅顯
微圖像以基于所述至少一幅顯微圖像確定所述血液細(xì)胞懸浮液中的病原體的存在或不存
在。
50.如權(quán)利要求49所述的系統(tǒng)，其中所述病原體是寄生蟲。
51.如權(quán)利要求38所述的系統(tǒng)，其中將所述控制單元配置為使所述顯微圖像獲取單元
獲取所述單層的多幅顯微圖像，所述多幅顯微圖像的至少兩幅在不同的條件下提供，所述
條件包括所述單層的不同部分和不同的照射條件。