本發(fā)明公開了一種用于檢測阿膠中驢皮源成分含量的組合物、試劑盒及其檢測方法。所述組合物由多肽I、多肽II、多肽III以及對照品檢測基質(zhì)組成，所述多肽I的氨基酸序列為SEQ ID NO.1所示，多肽II的氨基酸序列為SEQ ID NO.2所示，多肽III的氨基酸序列為SEQ ID NO.3所示，對照品檢測基質(zhì)為魚皮膠。通過多肽I的檢測值減去多肽II的檢測值，并利用多肽III的檢測值來修正檢測偏差，從而實現(xiàn)對阿膠中驢皮源成分的含量檢測。該方法具有含量檢測準(zhǔn)確、操作簡單的優(yōu)點，在阿膠的驢皮源成分檢測方面具有廣泛的應(yīng)用前景。

1.一種檢測阿膠中驢皮源成分含量的方法，其特征在于，包括如下步驟：1)對照品溶液的制備：對照品檢測基質(zhì)粉碎后，稱取一定量的對照品檢測基質(zhì)于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超聲使樣品完全溶解，得到基質(zhì)溶液，用配制得到的基質(zhì)溶液溶解稱量好的多肽I、多肽II和多肽III，搖勻，得到對照品母液，采用分步稀釋的方法，以基質(zhì)溶液為溶劑，將對照品母液稀釋500-10⁵倍，微孔濾膜過濾，續(xù)濾液中加胰蛋白酶溶液，酶解；其中，所述多肽I的氨基酸序列為Gly-Pro-Ser-Gly-Pro-Gln-Gly-Val-Arg，多肽II的氨基酸序列為His-Gly-His-Arg，多肽III的氨基酸序列為Gly-Val-Val-Gly-Pro-Gln-Gly-Ala-Arg，對照品檢測基質(zhì)為魚皮膠；2)待檢測樣品溶液的制備：取待測膠樣品于量瓶中，加NH₄HCO₃溶液溶解，微孔濾膜過濾，續(xù)濾液加胰蛋白酶酶解；3)將對照品溶液、待檢測樣品溶液分別放入液質(zhì)聯(lián)用儀，選擇m/z428.0→700.4、556.3，m/z253.8→312.2、369.2，m/z421.0→684.4、528.3作為檢測離子對進(jìn)行MRM掃描，其中選擇m/z428.0→700.4、m/z253.8→312.2、m/z421.0→684.4分別作為多肽I、多肽II和多肽III的定量離子對，待檢測阿膠樣品中多肽I的含量記為M₁、多肽II的含量記為M₂、多肽III的含量記為M₃；4)按下式計算出樣品中驢皮源成分的含量：樣品中驢皮源成分的含量％＝(M₁/853.9–M₂/505.5)×840/M₃×100％。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的NH₄HCO₃溶液為1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的對照品溶液的制備包括以下步驟：1)基質(zhì)溶液的制備：對照品檢測基質(zhì)粉碎后，稱取0.50g的對照品檢測基質(zhì)于250ml量瓶中，加少量1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液，超聲使樣品完全溶解，用1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液稀釋至刻度，搖勻；2)稱取0.05g對照品檢測基質(zhì)于25ml量瓶中，加少量1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液，超聲使樣品完全溶解，分別加入16.7mg的多肽I、9.9mg的多肽II和16.4mg的多肽III，用1％w/wpH8.0的NH₄HCO₃溶液稀釋至刻度，搖勻；3)對照品溶液的制備：采用分步稀釋的方法，以基質(zhì)溶液為溶劑，分別將對照品母液稀釋500-10⁵倍，微孔濾膜過濾，精密量取續(xù)濾液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒溫酶解12h。4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)中所述的待檢測樣品溶液的制備包括以下步驟：取0.05g待測膠樣品于25ml量瓶中，加少量1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液，超聲使樣品完全溶解，用1％w/w pH8.0的NH₄HCO₃溶液稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜過濾，精密量取續(xù)濾液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒溫酶解12h。5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中液質(zhì)聯(lián)用儀檢測的液相條件為：C₁₈反相色譜柱，流動相A為含有0.1％v/v甲酸的水溶液，流動相B為含有0.1％v/v甲酸的乙腈溶液，流速0.3ml/min；梯度洗脫：0→20min，流動相A 100％→25％，流動相B 0％→75％；質(zhì)譜條件：電噴霧正離子模式(ESI⁺)進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測。