本發明公開一種甲狀腺過氧化物酶抗體均相發光免疫分析試劑盒及其檢測方法。本發明包括均相發光96孔測定板，甲狀腺過氧化物酶抗體標準品，鏈霉親和素包被供體微球溶液和生物素標記甲狀腺過氧化物酶抗原，還包括甲狀腺過氧化物酶抗體包被的受體微球溶液。本發明樣本中的甲狀腺過氧化物酶抗體和受體微球上甲狀腺過氧化物酶抗體競爭結合生物素標記甲狀腺過氧化物酶抗原。測量已知不同含量標準品的發光信號，繪制標準曲線并獲得數學函數，未知樣本含量通過數學函數獲得。本發明集酶免疫分析和化學發光免疫分析的優點于一體，準確測定血清中甲狀腺過氧化物酶抗體水平，應用于自身免疫性甲狀腺疾病高危人群篩查、診斷和治療效果評估。

1.一種甲狀腺過氧化物酶抗體均相發光免疫分析試劑盒，包括均相發光96孔測
定板，甲狀腺過氧化物酶抗體標準品，鏈霉親和素包被供體微球溶液和生物素標
記甲狀腺過氧化物酶抗原，其特征在于：該試劑盒還包括甲狀腺過氧化物酶抗體
包被的受體微球溶液。
2.根據權利要求1所述甲狀腺過氧化物酶抗體均相發光免疫分析試劑盒，其特
征在于：甲狀腺過氧化物酶抗體包被受體微球溶液是按照以下配比的原料制成
的，
a.將欲標記的甲狀腺過氧化物酶抗體裝入透析袋中，置于0.1M?pH8.0磷酸鹽緩
沖液透析，去除Tris、甘氨酸含有氨基的成分，透析后的抗體溶液，用紫外分光
光度計測定抗體含量，調整濃度至1-2毫克/毫升；
b.受體微球加入0.1M?pH8.0磷酸鹽緩沖鹽水溶液，離心洗滌1-2次，每次16000
×G15分鐘，吸干上清液,將微球濃度調整至10-20毫克/毫升待用；
c.按受體微球:透析后甲狀腺過氧化物酶抗體為1:10的質量比混合于0.1M?pH8.0
磷酸鹽緩沖鹽水溶液中，再依次加入體積百分比0.6-0.625％的10％吐溫20溶液、
4-5％新鮮配制的400mM氰基硼氫化鈉溶液，充分混勻置37℃溫箱內反應48
小時以上；
d.用800mM氫氧化鈉溶液配制濃度為65毫克/毫升的羧甲基羥胺半鹽酸鹽，加
體積百分比為4-5％的羧甲基羥胺半鹽酸鹽于標記后的離心管內，置37℃溫箱內
反應1小時；
e.將離心管置于離心機內，16000×G離心15分鐘；用移液管吸取上清溶液，再
加入100mM?Tris-HCl?pH8.0溶液，重新懸浮微球；重復離心，最終調整濃度至
5-10微克/毫升備用；
f.用pH?8.00.1M?Tris-HCl緩沖液將標記后受體微球稀釋至20微克/毫升，制備
受體微球溶液。