一種胰腺癌腫瘤標志物及其應用方法。本發明涉及一種胰腺癌腫瘤標志物及其應用方法。所示胰腺癌腫瘤標志物為SERPINA6。SERPINA6在胰腺癌腫瘤組織中呈現高表達，并分泌至外周血中。通過檢測胰腺癌病理組織中的SERPINA6表達水平或外周血清中的SERPINA6濃度，能夠快速地發現和診斷胰腺癌。本發明還公開了檢測SERPINA6的ELISA試劑盒及時間分辨免疫熒光試劑盒的使用方法。

1.一種檢測SERPINA6的試劑在制備用于診斷胰腺癌的時間分辨免疫熒光試劑盒中的
用途，其特征在于：所述試劑盒包括以下組成：
（1）包被緩沖液，其為PBS，其成分為水，140mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa₂HPO₄，
1.8mMKH₂PO₄，pH值為7.4；
（2）封閉液，其為含1%BSA的PBS，其成分為PBS，1%BSA；
（3）洗滌液，其為含0.05%Tween-20的Tris-HCl緩沖液，其成分為50mM的Tris-HCl緩沖
液，0.05%Tween-20；
（4）加樣緩沖液，其為含1%BSA的PBS，其成分為PBS，1%BSA；
（5）熒光增強液；
（6）檢測緩沖液，其為50mM的Tris-HCl緩沖液，其中含有1%BSA，1%bovine globulin，
0.05%Tween-40，二乙烯三胺五乙酸；
（7）包被抗體，其為單克隆小鼠抗人SERPINA6抗體，儲存濃度為1μg/μl；
（8）檢測抗體，其為生物素化的兔抗人SERPINA6多抗，儲存濃度為50ng/μl；
（9）Eu^3＋標記的鏈親和霉素，儲存濃度為0.1μg/μl；
（10）標準品，重組人SERPINA6蛋白，濃度為100μg/μl；
試劑盒的使用方法具體為以下步驟：
（1）用PBS稀釋包被抗體－單克隆小鼠抗人SERPINA6抗體至濃度為4ug/ml，以100μl/孔
加入96孔酶標板，4℃過夜；
（2）棄去包被抗體，300μl/孔洗滌液洗滌三次，加入封閉液200μl/孔，37℃孵育1h；
（3）棄去封閉液，300μl/孔洗滌液洗滌三次，加入待測樣品和倍比稀釋的標準品100μl/
孔，37℃孵育1h；
（4）棄去樣品和標準品，300μl/孔洗滌液洗滌三次；
（5）用加樣緩沖液稀釋檢測抗體－生物素化的兔抗人SERPINA6多抗至濃度為75ng/ml，
以100μl/孔加入稀釋好的檢測抗體，37℃孵育1h；
（6）棄去檢測抗體，300μl/孔洗滌液洗滌三次；
（7）用檢測緩沖液稀釋Eu^3＋標記的鏈親和霉素，終濃度為500ng/ml，以100μl/孔加入酶
標板，37℃避光孵育1h；
（8）棄去Eu^3＋標記的鏈親和霉素，300μl/孔洗滌液洗滌四次；
（9）加入熒光增強液200μl/孔，室溫避光緩慢水平搖動5min；
（10）讀板：設定激發光波長為337nm，發射光波長為615nm，延時200微秒測定615nm處的
熒光值；
（11）利用統計學繪圖軟件根據測定的值繪制標準曲線；
（12）通過標準曲線和未知濃度樣品的熒光值計算待測樣品中的SERPINA6的濃度；
胰腺癌患者外周血中SERPINA6的濃度顯著高于正常人。