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乳糖在提高重組菌表達CbFDH酶的穩定性中的應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-15
  • 技術成熟度:正在研發
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201810406990.7 
  • 技術(專利)名稱 乳糖在提高重組菌表達CbFDH酶的穩定性中的應用 
  • 項目單位 山東省科學院生態研究所
  • 發明人 季蕾,張強,傅曉文,王加寧,宋繁永,李天元,郭書海 
  • 行業類別 健康用品-營養保健品
  • 技術成熟度 正在研發
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 沈栩汀
  • 發布時間 2022-01-15  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及乳糖在提高重組菌表達CbFDH酶的穩定性中的應用,通過將乳糖添加至表達CbFDH酶的重組菌的發酵培養基中進行發酵培養實現。本發明首次公開了乳糖在提高甲酸脫氫酶活性和穩定性中所起的特殊作用;通過發明人的實際實驗,在培養表達CbFDH酶重組菌的過程中,向發酵培養基中加入特定濃度的乳糖后,CbFDH酶活力較常規誘導培養基提高了11.9倍,同時穩定性也得到大幅提升。
    展開
  • 02

    說明書

    1.乳糖在提高重組菌表達的單位重量的CbFDH酶酶活、降低重組菌表達的CbFDH酶用量、或者提高重組菌表達CbFDH酶穩定性中的應用,通過將乳糖添加至表達CbFDH酶的重組菌的發酵培養基中進行發酵培養,所述發酵培養基,組份如下:蛋白胨9~11g/L,酵母提取物4.5~5.5g/L,Na2HPO4·12H2O 8~10g/L,KH2PO4 6.5~7.0g/L,NH4Cl 3~3.5g/L,葡萄糖0.4~0.6g/L,乳糖3.5~5.5g/L,CaCl2 0.015~0.025g/L,甘油按體積百分比計0.7~0.8%,pH6.8~7.2;所述重組菌的構建方法如下:PCR擴增獲得來源于博伊丁假絲酵母(Candida boidinii)的甲酸脫氫酶基因fdh,基因序列如SEQ ID NO.2所示,將擴增后的甲酸脫氫酶基因fdh連接至大腸桿菌表達載體pET28a(+),構建獲得攜帶fdh基因的重組表達載體pET28a(+)-fdh,轉化宿主菌大腸桿菌BL21(DE3),挑取轉化子,篩選獲得表達甲酸脫氫酶的重組大腸桿菌E.coli BL21-fdh。2.如權利要求1所述的應用,其特征在于,所述乳糖濃度為3.5~5g/L。3.如權利要求1所述的應用,其特征在于,所述乳糖濃度為4.5~5g/L。4.如權利要求2所述的應用,其特征在于,所述發酵培養基,組份如下:蛋白胨10g/L,酵母提取物5g/L,Na2HPO4·12H2O 9g/L,KH2PO4 6.8g/L,NH4Cl 3.3g/L,葡萄糖0.5g/L,乳糖4.5~5g/L,CaCl2 0.02g/L,甘油按體積百分比計0.74%,pH7.0。5.如權利要求1所述的應用,其特征在于,步驟如下:將表達CbFDH酶的重組菌接種于含有乳糖的發酵培養基中,在28~32℃、150~180rpm條件下培養16~18h,收集菌體,經細胞破碎,離心,收集上清液,制得甲酸脫氫酶CbFDH。6.如權利要求5所述的應用,其特征在于,所述細胞破碎,步驟如下:將菌體按質量體積比1:(15~25)的比例與pH7.5的磷酸緩沖液混合均勻,單位g/ml;在195W的超聲波條件下、采用間歇超聲波處理方式進行細胞破碎6min,每次超聲波破碎時間3s,間歇時間5s。7.如權利要求5所述的應用,其特征在于,所述離心條件為:3000r/min離心2min。8.如權利要求1所述的應用,其特征在于,所述PCR擴增的上游擴增引物序列如SEQ IDNO.3所示,下游擴增引物序列如SEQ ID NO.4所示。
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