本發(fā)明涉及蜂王漿中雙甲脒及其代謝產(chǎn)物殘留的檢測(cè)方法，尤其涉及一種液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定蜂王漿中雙甲脒、單甲脒2,4?二甲基苯基甲酰胺和2,4?二甲基苯胺的方法。一種液相色譜?質(zhì)譜/質(zhì)譜法測(cè)定蜂王漿中雙甲脒及其代謝產(chǎn)物殘留量的方法，該方法試樣加氨化水稀釋后用氨化乙腈沉淀蛋白并提取，通過(guò)中性氧化鋁固相萃取柱對(duì)提取液進(jìn)行凈化，采用液相色譜?質(zhì)譜/質(zhì)譜儀檢測(cè)，雙甲脒和2,4?二甲基苯胺內(nèi)標(biāo)法定量，單甲脒和2,4?二甲基苯基甲酰胺外標(biāo)法定量。該方法的靈敏度能滿足蜂王漿中雙甲脒及其代謝物殘留量的檢測(cè)和確證要求。

1.液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測(cè)定蜂王漿中雙甲脒及其代謝產(chǎn)物殘留量的方法，所述的代謝產(chǎn)物為單甲脒2,4-二甲基苯基甲酰胺和2,4-二甲基苯胺，其特征在于該方法包括以下的步驟：一、提?。悍Q取蜂王漿試樣2.0g于兩個(gè)50mL聚塞離心管中，加入同位素內(nèi)標(biāo)，加8mL5％氨水溶液，2000轉(zhuǎn)/分鐘，渦旋混勻5分鐘，靜置5分鐘，加10mL5％氨水乙腈溶液，2000轉(zhuǎn)/分鐘，渦旋混勻，靜置5分鐘，定容至20mL，渦旋混勻5分鐘，8500轉(zhuǎn)/分鐘離心，移取上清液2.0mL，加2mL5％氨水乙腈溶液混勻，渦旋混勻，8500轉(zhuǎn)/分鐘離心，取上清液待凈化；二、活化氧化鋁固相萃取柱采用3mL乙腈和3mL5％氨水乙腈溶液依次活化；三、凈化將提取溶液轉(zhuǎn)移至氧化鋁固相萃取柱，接收流出液，加2mL5％氨水乙腈溶液洗滌氧化鋁固相萃取柱，接收全部流出液，40℃下氮?dú)獯抵?.5mL以下，加乙腈至2mL，再加2mL水，渦旋混勻，過(guò)0.22μm濾膜，待LC-MS/MS測(cè)定；四、測(cè)定4.1)液相色譜參數(shù)：Agilent Eclipse XDB-C₁₈色譜柱，150mm×4.6mm(i.d)，5μm；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：25℃；流動(dòng)相：0.15％甲酸溶液和乙腈梯度洗脫；液相色譜梯度洗脫程序如下： 時(shí)間(min) 流速(mL/min) 0.15％甲酸水溶液(％) 乙腈(％) 0.00 0.4 60.0 40.0 8.00 0.4 35.0 65.0 9.00 0.7 5.0 95.0 14.00 0.7 5.0 95.0 15.00 0.7 60.0 40.0 16.00 0.4 60.0 40.0 19.00 0.4 60.0 40.0 4.2)質(zhì)譜參數(shù)離子源參數(shù)：電離方式：電噴霧電離；掃描模式：正離子；監(jiān)測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；離子源溫度：130℃；氣體流速：16L/min；鞘氣溫度：250℃；鞘氣流速：11L/min；毛細(xì)管電壓：2500V；雙甲瞇、單甲脒、2,4-二甲基苯基甲酰胺和2,4-二甲基苯胺的質(zhì)譜參數(shù)如下： *表示為定量離子對(duì)；4.3)空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按步驟4.1)和4.2)測(cè)定方法進(jìn)行；4.4)結(jié)果計(jì)算和表述按公式(1)計(jì)算試樣中蜂王漿中雙甲脒及其代謝產(chǎn)物殘留量： 式中：X—試樣中蜂王漿中雙甲脒及其代謝產(chǎn)物量的含量，單位為毫克每千克；C—由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到樣液中蜂王漿中雙甲脒及其代謝產(chǎn)物的濃度，單位為微克每毫升；V—樣液最終體積，單位為毫升；m—最終樣液所代表的試樣量，單位為克。