本發明是一種用于活性細胞中Zn成像的熒光探針方法，其特征是以1,5?二(7?羥基?8?香豆素亞甲基)?二氨基脲，簡稱探針s3，為微量Zn的熒光增強型探針，探針s3及Zn能分別滲透到活性細胞內，與細胞具有良好的相容性，通過探針s3對細胞內Zn染色后，用熒光倒置顯微鏡檢測顯現清晰的藍色熒光細胞圖像，探針s3是活性細胞的熒光照影試劑，探針s3的化學結構式為：

1.一種用于活細胞成像的熒光探針方法，其特征是以1,5-二(7-羥基-8-香豆素亞甲
基)-二氨基脲，簡稱探針s3，為細胞內微量Zn²⁺的熒光增強型探針，探針s3及Zn²⁺能分別滲
透到活細胞內，與細胞具有良好的相容性，通過探針s3對細胞內Zn²⁺染色后，用熒光倒置顯
微鏡檢測出清晰的藍色熒光細胞圖像，探針s3是一種活細胞中Zn²⁺的熒光成像試劑。
2.根據權利要求1所述的一種用于活細胞成像的熒光探針方法，其特征是用探針s3對
細胞內Zn²⁺進行染色，用熒光倒置顯微鏡觀測活體細胞，染色成像的具體方法為：活性PC3細
胞經復蘇接種于含10%胎牛血清以及含1%雙抗的培養基中，在溫度為37℃，5% CO₂及飽和濕
度為100%的培養箱中培養，每隔2-3天傳代1次，選擇生長狀態良好的細胞接種于12孔板中
培養，密度為2×10⁴個/ml，次日用新鮮培養基清洗細胞兩次，將細胞浸入含10 μmol·L^-1探
針s3中，在37℃，5%CO₂、飽和濕度100%的培養箱中孵育30 min，吸出含探針s3的培養液，用
新鮮培養基清洗細胞三次，熒光倒置顯微鏡下觀察并進行亮場和暗場拍照；再浸入含50 μ
mol·L^-1 Zn²⁺溶液，在37℃、5%CO₂、飽和濕度100%的培養箱中孵育30 min，進行細胞內探針
對Zn²⁺染色，吸出含Zn²⁺溶液的培養液，染色后的細胞再用新鮮培養基清洗三次，在熒光倒
置顯微鏡下觀察探針對細胞內Zn²⁺染色后的熒光成像，對細胞影像拍照獲得清晰的細胞輪
廓影像。
3.根據權利要求1所述的一種用于活細胞成像的熒光探針方法，其特征是細胞成像中，
探針s3和Zn²⁺都能滲透到活體PC3細胞內，細胞呈圓滑飽滿狀，探針與細胞具有良好的相容
性，未見細胞凋亡，對細胞無毒性；探針與Zn²⁺離子在細胞內染色后，熒光倒置顯微鏡檢測顯
示了清晰的藍色熒光細胞分布，染色具有特定區域的選擇性聚集能力。
4.根據權利要求2所述的一種用于活細胞成像的熒光探針方法，其特征是所用的試劑
為分析純或生化試劑，所用水為二次蒸餾水或生理鹽水；所用活體PC3細胞為人體前列腺癌
細胞；所用的拍照設備為熒光倒置顯微鏡。
5.根據權利要求1所述的一種用于活細胞成像的熒光探針方法，其特征是所述探針s3
化學結構式為：

s3
分子式：C₂₁H₁₄N₄O₇
分子量：434.09
熔 點：大于300 ℃，溶解性：微溶于氯仿、二甲亞砜、N,N-二甲基甲酰胺，不溶于乙醇,
光譜性質：在N,N-二甲基甲酰胺溶液與水的混合溶劑2/3，v/v中的熒光激發波長是310nm，
發射波長是454nm，紫外吸收波長是310nm。