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一種雙標記納米金探針的制備方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-11-26
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200810215874.3 
  • 技術(專利)名稱 一種雙標記納米金探針的制備方法 
  • 項目單位 深圳市人民醫院
  • 發明人 李富榮,齊暉,任莉莉,孔小麗,周漢新 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 鄭惟圩
  • 發布時間 2021-11-26  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種雙標記納米金探針及其制備方法和應用。該探針包括:納米金粒子為核,表面同時連接抗體和寡核苷酸。所述的雙標記納米金探針的制備方法,包括如下的步驟:①連接反應:在納米金溶膠中加入濃度為寡核苷酸溶液、抗體溶液,混合均勻,使溶液中納米金粒子和抗體、核酸能充分作用,制成混合液;②穩定和封閉反應:配制含SDS的量為5-10%的PBS緩沖溶液,然后加入步驟①所制成的混合液中,加入封閉劑,形成納米探針的溶膠。該雙標記納米金探針能將抗原的檢測轉化為對核酸物質的檢測,應用于腫瘤標記志物、激素、病原體微量蛋白質的檢測。
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  • 02

    說明書

    1.一種雙標記納米金探針的制備方法,該探針包括:納米金粒子為核,表面同時連接抗體和寡核苷酸,所述納米金探針平均粒徑為10-20nm;其中,所述抗體是通用IgG,所述的通用IgG是多克隆抗體或單克隆抗體之一或其組合;所述的寡核苷酸是巰基修飾的單鏈DNA或RNA分子之一或其組合;所述的寡核苷酸的片段的長度是10~50bp;所述制備方法包括如下的步驟:?①檸檬酸三鈉還原法制備納米金溶膠:將0.005%--0.04%的HAuCl4溶液加熱至沸騰,高速攪拌條件下快速加入0.5%--3%的檸檬酸三鈉溶液,其中所需的HAuCl4溶液與檸檬酸三鈉溶液的體積比為100:8--100:2,繼續加熱攪拌至混合均勻,然后自然冷卻,形成納米金溶膠;②連接反應:在濃度為3-3.3nM的納米金溶膠中加入濃度為6.6~33ug/ml的寡核苷酸溶液、濃度4-10ug/ml的抗體溶液,混合均勻,在溫度為4~30℃,控制反應pH值為6~9,時間為10~20h,使溶液中納米金粒子和抗體、核酸能充分作用,制成混合液;?③穩定和封閉反應:配制含SDS的量為5-10%的PBS緩沖溶液,其中PBS的量為0.01-0.1M,然后加入步驟②所制成的混合液中,控制活性劑SDS的終濃度為0.005-0.015%,混合均勻,然后逐漸加入0.3-1.2M的穩定劑,邊加邊混勻,最終控制穩定劑的濃度為0.1M~0.2M,靜置平衡6-12h以上,最后,加入封閉劑,控制封閉劑的終濃度為0.5%~1%,混合均勻,形成納米探針的溶膠;④低溫超速離心純化:對步驟③中的納米探針的溶膠,進行12000~16000r/min轉速下的離心,離心時間為15~45min,溫度控制在4-8度,除去上清液,用0.01%~0.10%疊氮化納的洗滌液反復洗滌,4~8℃保存。?2.根據權利要求1所述的制備方法,其在步驟①之后,還包括步驟:?把步驟①所得納米金溶膠用0.1—0.25μm濾膜過濾。?3.根據權利要求1所述的制備方法,其中所述的穩定劑是NaCl水溶液,所述的封閉劑為牛血清白蛋白BSA。?4.根據權利要求1所述的制備方法,其中步驟②所述的混合均勻為:先用渦旋器混勻,然后采用搖床50—900r/min輕搖。?5.根據權利要求1所述的制備方法,其中所述的抗體是羊抗小鼠IgG、抗人PSA多克隆抗體、抗人HCG多克隆抗體、抗人HBV多克隆抗體、抗人HIV多克隆抗體、抗人ADDL多克隆抗體、抗人心納素ANP多克隆抗體、抗人NSE多克隆抗體、抗人C-肽多克隆抗體或單克隆抗體之一或其組合。?
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