本發明公開了一種ZnSe量子點標記過氧化氫酶熒光探針的制備方法，其步驟：A、制備KHSe溶液：通過硼氫化鉀還原硒粉制備；B、分別稱取硼氫化鉀和硒粉于具塞試管中，加入高純水，塞上塞子，得無色透明液體，為硒氫化鉀；C、稱取醋酸鋅晶體和還原型谷胱甘肽，溶解于無氧高純水中；D、在攪拌和不斷通入高純氬氣的條件下，加入硒氫化鉀，用氫氧化鈉溶液調節pH值，待其混合；E、分裝于聚四氟乙烯消解罐中，加熱，KHSe、Zn(Ac)·2HO，還原型谷胱甘肽的摩爾比率分別為1/15~1/10：1：1.6~1.8；F、取ZnSe量子點，過氧化氫酶，加入乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽于恒溫振蕩，得過氧化氫酶熒光探針。工藝簡單，易控制；具有很好的生物相容性和雙重檢測性能，可進行熒光檢測與酶活性檢測。

1.一種ZnSe量子點標記過氧化氫酶熒光探針的制備方法，其步驟是：A、制備硒氫化鉀溶液：通過硼氫化鈉還原硒粉制備，反應方程式如下：????????????4KBH₄?+?2Se?+?7H₂O?→?2KH₄Se?+?K₂B₄O₇?+11H₂↑????B、?分別稱取0.03006g硼氫化鉀和0.00789g硒粉于具塞試管中，向其中加入2mL高純水，塞上塞子，于1~5℃下反應0.5~1.5h，得無色透明液體，為0.05mol/L的硒氫化鉀；C、分別稱取0.10975~0.16463g醋酸鋅晶體和0.24586~0.41489g還原型谷胱甘肽，溶解于200mL無氧高純水中；D、在150~300轉/min的攪拌和不斷通入高純氬氣的條件下，加入1mL0.05mol/L的硒氫化鉀，用5mol/L的氫氧化鈉溶液調節溶液pH值為10-11，待其混合；E、以每罐50ml分裝于聚四氟乙烯消解罐中，于93-97℃下微波加熱60~75min，KH₄Se、Zn(Ac)₂·2H₂O，還原型谷胱甘肽的摩爾比率分別為?1/15~1/10：1：1.6~1.8；F、取4mL根據步驟A-E的方法制備好的濃度為1?mmol/L的?ZnSe量子點，1ml配制好的1×10^-9mol/L的過氧化氫酶溶液，再加入0.2mL0.24g/L的乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽于30℃恒溫振蕩0.5-1h，使ZnSe量子點通過偶聯劑乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亞胺鹽酸鹽與過氧化氫酶溶液進行充分反應，加入0.3mL、0.1mol/L的2-巰基乙醇終止交聯，制得量子點標記過氧化氫酶熒光探針。