1.一種基于熒光共振能量轉移來檢測水溶液中二價汞離子和/或銀離子的方法,其特征在于:(一)檢測探針的制備(1)巰基丙酸MPA包裹的碲化鎘CdTe量子點的制備將硼氫化鈉NaBH4、超純水與碲Te粉一起混合在反應容器中,使NaBH4的濃度為2-3M,Te粉含量為0.5-0.6M,再將反應容器置于0℃冰水浴中反應12h以制備澄清的NaHTe溶液備用;稱取一定量的無機鎘鹽Cd2+溶解于水中,控制Cd2+濃度為0.01-0.02M,在劇烈的攪拌下滴加適量的MPA,用NaOH溶液調節pH為11.20,通N2除氧、保護30min后迅速加入NaHTe溶液,維持Cd2+:Te2-:?MPA的摩爾比為1:?0.4-0.5:?2.2-2.5;反應后即得到CdTe量子點的前驅體溶液;取前驅體溶液加到以聚四氟乙烯作內襯的不銹鋼反應釜中,160℃下反應20min,即得到所需要的CdTe量子點;(2)檢測用的核酸探針的設計與合成氨基修飾過的單鏈核酸探針DNA1:?5'-NH2-GTACAAGATG-3';未作任何修飾的單鏈核酸探針DNA2:?5'-GAGCTTTTCA?GACGCATCTT?GTACGACTCG?CTCCCCATAC-3';熒光染料TAMRA修飾過的單鏈核酸探針TAMRA-DNA:?5'-TAMRA-TTTTGCTC-3';?吲哚類菁染料Cy5修飾過的單鏈核酸探針Cy5-DNA:?5'-Cy5-GTATCCCC-3';(3)量子點與核酸的熒光探針CdTe-DNA的制備首先制備CdTe與DNA1的耦聯物:把1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亞胺EDC,N-羥基琥珀酰亞胺NHS與CdTe溶液按適當的比例混合到一起,活化0.5-1?h,然后加入DNA1?水溶液,在25℃下反應4h,進行超濾以徹底去除未與CdTe耦聯的DNA1,即制備得到CdTe?-DNA1;然后,把CdTe?-DNA1與DNA2在室溫下進行雜交反應6h,超濾以去除未雜交的DNA2,即制備得到量子點與DNA的探針CdTe?-DNA1-DNA2;最后,把?Cy5-DNA與TAMRA-DNA的水溶液分別加到上述制備的CdTe?-DNA1-DNA2中,即制備得到檢測用的CdTe-DNA熒光探針;(二)重金屬離子Ag+和/或Hg2+的檢測(1)Ag+?的檢測銀離子與3-(N-嗎啉)丙烷磺酸MOPS之間的鍵合力很弱,所以選擇MOPS緩沖液作為檢測體系:100nM?步驟(一)中制備的CdTe?-DNA熒光探針,10mM?磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉NaH2PO4/Na2HPO4、20mM的MOPS、50mM的硝酸鈉NaNO3;將含有0-50?nM不同濃度銀離子的水溶液加入到上述檢測體系中,并在25℃下維持0.5h,使Ag+誘導的Cy5-DNA與DNA2雜交反應完全進行,然后測得整個體系的熒光發射圖譜;(2)Hg2+?的檢測檢測方法與步驟(1)類似,只是將步驟(1)中Ag+離子溶液換成Hg2+溶液;含有0-50?nM不同濃度Hg2+離子的水溶液加入到上述檢測體系中,并在25℃下維持0.5h,使Hg2+?誘導的TAMRA-DNA與DNA2雜交反應完全進行,然后測量整個體系的熒光發射圖譜;(3)同時進行Ag+?和?Hg2+?的檢測檢測方法與步驟(1)類似,只是將步驟(1)中Ag+離子溶液換成Ag+?和?Hg2+?的混合溶液;含有0-50?nM不同濃度Ag+?和?Hg2+?的水溶液加入到上述檢測體系中,并在25℃下維持0.5h,使Hg2+?誘導的TAMRA-DNA與DNA2雜交反應和Ag+誘導的Cy5-DNA與DNA2雜交反應完全進行,然后測量整個體系的熒光發射圖譜。2.根據權利要求1所述的一種基于熒光共振能量轉移來檢測水溶液中二價汞離子和/或銀離子的方法,其特征在于:量子點與核酸的熒光探針CdTe-DNA的制備:首先是制備CdTe與DNA1的耦聯物:把320μL?0.1mM?的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亞胺EDC,200μL?0.0125?mM的N-羥基琥珀酰亞胺NHS與1280μL?1μM?CdTe溶液混合到一起,活化0.5-1?h;然后加入100μL?10μM的DNA1?水溶液,在25℃下反應4小時;然后用超濾膜以5000rpm?進行超濾15min,并用超純水重懸,再次超濾,如此循環3次,徹底去除未與CdTe耦聯的DNA1,即制備得到CdTe?-DNA1;然后,把900μL?1μM的CdTe-DNA1與100μL?20μM?DNA2在室溫下進行雜交反應6h,進行同樣的超濾步驟去除未雜交的DNA2,即制備得到CdTe-DNA1-DNA2;最后,把100μL?20μM?Cy5-DNA?與100μL?20μM?TAMRA-DNA的水溶液分別加到上述制備的CdTe-DNA1-DNA2中,即制備得到檢測用的CdTe-DNA熒光探針。
展開