一種博來霉素（BLMs）含量的檢測方法，屬于電化學發光和傳感器技術領域。利用電化學發光試劑標記DNA制備DNA探針（Ru-DNA），將羧基化的碳納米粒子修飾電極，通過靜電斥力和π-π堆積作用之間的競爭作用，利用DNA與碳納米粒子非共價鍵自組裝原理構建了碳納米粒子修飾電極電化學發光生物傳感器。將目標物博來霉素與DNA探針作用，導致DNA被切割，吸附在碳納米粒子修飾電極上DNA探針減少，產生的弱的電化學發光信號，以此實現對博來霉素的測定。這種方法有著簡單、快速的優勢。

1.用于測定博萊霉素的碳納米粒子修飾電極電化學發光生物傳感器的制備方法，其特征
在于，包括以下步驟：
a將0.1～1.0g聚乙烯醇溶解在10ml水中制得均相溶液，然后放入微波爐中加熱15min
（分鐘）至溶液顏色改變，將上述溶液以13000rpm離心30min去除雜質，得碳納米粒子；
將0.1～2.0克碳納米粒子與0.5mL?63%的硝酸和0.5mL二甲基甲酰胺混合后在100攝氏度下
反應8小時（h）；
b將200μL?2OD?DNA加入到200μL?1.0×10^-3mol/L?Ru(bpy)₂(dcbpy)NHS中，室溫下振
蕩6～18h，隨后，在該溶液中加入100μL?3mol/L醋酸鈉和2.0mL冷無水乙醇，溶液在-16℃
冷卻24h，然后在12000轉速和-4℃下離心30min，沉淀物用1mL冷乙醇清洗三次，除去
未反應的Ru(bpy)₂(dcbpy)NHS，得Ru(bpy)₂(dcbpy)NHS標記的電化學發光探針，然后用1.0mL
0.10mol/L磷酸緩沖溶液溶解；
c金電極經1.0μm，0.3μm，0.05μm的α-A1₂O₃拋光粉拋光后，用二次蒸餾水沖洗干凈，
并在超聲波水浴中超聲5min，用高純氮氣吹干，備用；將處理好的金電極浸入100μL?10^-4M
的巰基乙胺中，在37℃下固定2～8h后，用磷酸緩沖溶液沖洗二次，取1mL羧基化碳納米
粒子溶液，加入N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）3.6mg、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸
鹽（EDC）7.2mg，在37℃下活化1h，再將上述電極浸入其中，反應過夜，制得碳納米粒
子修飾電極，利用電化學發光探針與碳納米粒子修飾電極之間的靜電斥力和π-π堆積作用之
間的競爭作用，得碳納米粒子修飾電極電化學發光生物傳感器。
2.利用權利要求1所述的制備方法制備得到的電化學發光生物傳感器測定博來霉素的方
法，其特征在于，包括以下步驟：
在100μL電化學發光探針中加入不同濃度的博來霉素溶液和0.1mM?Fe²⁺，然后將修飾
電極浸入其中反應7min，用pH?7.4?10mM的磷酸緩沖溶液沖洗電極三次，然后進行電化
學發光測定，根據作用后電極表面電化學發光探針所產生電化學發光信號，對博來霉素進行
定量檢測。
3.如權利要求2所述的測定博萊霉素的方法，所述的電化學發光測定具體為：采用三電
極系統檢測，工作電極為金電極，對電極為鉑絲電極，參比電極為Ag/AgCl電極，參數設置
為：高壓800V，放大級數為3，控制電位為0-1.30V。
4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的DNA部分序列為
5'-CGCTTTAAAAAAAGTG-(CH₂)₆-NH₂-3'。
5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的DNA部分序列為3'末端為氨基修
飾。