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一種用于EB病毒衣殼抗原和核抗原1蛋白抗體聯合檢測的蛋白質芯片及其制備和應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-12
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201611023054.5 
  • 技術(專利)名稱 一種用于EB病毒衣殼抗原和核抗原1蛋白抗體聯合檢測的蛋白質芯片及其制備和應用 
  • 項目單位 安徽醫科大學
  • 發明人 杜衛東,呂慧 
  • 行業類別
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 衛小亮
  • 發布時間 2021-12-12  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種用于EB病毒衣殼抗原和核抗原1蛋白抗體聯合檢測的蛋白質芯片及其制備和應用,其特征在于:蛋白質芯片用于人血清中EB病毒衣殼抗原IgM抗體、衣殼抗原IgG抗體和核抗原1蛋白IgG抗體的聯合檢測;所述蛋白質芯片是在固相載體表面點陣固定有EB病毒衣殼抗原探針和EB病毒核抗原1蛋白探針;所述固相載體為S?S?PEG?COOH化學修飾的金箔芯片,在所述S?S?PEG?COOH上用EDC和NHS活化羧基以固定特異性抗原為探針。本發明的芯片具有高特異性和敏感性,其可視檢測限與CLIA法測得EB病毒抗體的最低檢測限近乎相同,且其可以實現高通量聯合檢測。
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  • 02

    說明書

    1.一種用于EB病毒衣殼抗原和核抗原1蛋白抗體聯合檢測的蛋白質芯片,其特征在于:
    所述蛋白質芯片用于人血清中EB病毒衣殼抗原IgM抗體、衣殼抗原IgG抗體和核抗原1蛋白
    IgG抗體的聯合檢測;所述蛋白質芯片是在固相載體表面點陣固定有EB病毒衣殼抗原探針
    和EB病毒核抗原1蛋白探針;所述固相載體為S-S-PEG-COOH化學修飾的金箔芯片,在所述S-
    S-PEG-COOH上用EDC和NHS活化羧基以固定特異性抗原為探針。
    2.一種權利要求1所述的用于EB病毒衣殼抗原和核抗原1蛋白抗體聯合檢測的蛋白質
    芯片的制備方法,其特征在于按如下步驟進行:
    步驟1、對金箔芯片進行表面化學修飾,獲得固相載體
    以濃度為2mM的22-(3,5-bis((6-mercaptohexyl)oxy)phenyl)-3,6,9,12,15,18,21-
    heptaoxadocosanoic acid的乙醇溶液為修飾液1;將NHS和EDC溶于0.1M的MES緩沖液中作
    為修飾液2,在所述修飾液2中NHS濃度為50mM、EDC濃度為200mM;
    對金箔芯片進行清洗后,浸入所述修飾液1中,黑暗條件下室溫搖蕩孵育3小時,取出后
    用無水乙醇溶液清洗、氮氣吹干;然后再以所述修飾液2點樣孵育0.5小時,取出后用PBST溶
    液清洗、氮氣吹干,獲得固相載體待用;
    所述PBST溶液是由濃度0.01M、pH=7.4的磷酸緩沖液PBS與Tween 20混合配置而成的,
    在所述PBST溶液中Tween20的體積濃度為0.1%;
    步驟2:固定EB病毒抗原探針
    將衣殼抗原溶于PBST-BSA溶液中,配制濃度不低于50μg/mL的衣殼抗原溶液;
    將核抗原1蛋白溶于PBST-BSA溶液中,配制濃度不低于6.25μg/mL的核抗原1蛋白溶液;
    將所述衣殼抗原溶液點樣孵育于固相載體的奇數行,將核抗原1蛋白溶液點樣孵育于
    固相載體的偶數行,室溫孵育2h,使固相載體的奇數行包被EB病毒衣殼抗原探針、偶數行包
    被EB病毒核抗原1蛋白探針;取出后將芯片浸沒在1M乙醇胺中15分鐘,以封閉剩余的已活化
    羧基;最后再用PBST溶液清洗、氮氣吹干,即獲得用于EB病毒衣殼抗原和核抗原1蛋白抗體
    聯合檢測的蛋白質芯片;
    所述PBST-BSA溶液是由濃度0.01M、pH=7.4的磷酸緩沖液PBS、Tween20及BSA混合構
    成,在所述PBST-BSA溶液中Tween20的體積濃度為0.1%,BSA的質量濃度為0.1%。
    3.根據權利要求2所述的制備方法,其特征在于:步驟1對金箔芯片進行清洗的方法為:
    將NH3、H2O2及H2O按體積比1:1:5混合構成TL1清洗液,將金箔芯片浸入盛有TL1清洗液的不
    銹鋼清洗盒內,82℃水浴6分鐘,清洗2次,取出之后用超純水沖洗,再用無水乙醇清洗,最后
    用氮氣吹干。
    4.一種用于EB病毒衣殼抗原和核抗原1蛋白抗體聯合檢測的試劑盒,其特征在于,所述
    試劑盒內包含有:權利要求1所述的蛋白質芯片;PBST-BSA溶液;將Cy3標記驢抗人IgG抗體
    溶于PBST-BSA溶液中,構成的濃度2.5μg/mL的IgG熒光二抗溶液;將Cy5標記羊抗人IgM抗體
    和Cy3標記驢抗人IgG抗體共同溶于PBST-BSA溶液中,構成的濃度各為2.5μg/mL的IgM+IgG
    熒光二抗溶液;
    所述PBST-BSA溶液是由濃度0.01M、pH=7.4的磷酸緩沖液PBS、Tween20及BSA混合構
    成,在所述PBST-BSA溶液中Tween20的體積濃度為0.1%,BSA的質量濃度為0.1%。
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專利技術附圖

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