本發(fā)明具體公開了一種復(fù)合膜修飾的生物傳感器及其制備和應(yīng)用，該生物傳感器包括有一基體電極，其感應(yīng)端包覆有一芳香族二胺聚合物膜，膜上修飾有碳納米管-剛果紅結(jié)合物層，結(jié)合物層上吸附有納米金顆粒層。其制備方法為：先在基體電極感應(yīng)端通過電聚合反應(yīng)形成聚合物膜；再在膜上修飾碳納米管-剛果紅結(jié)合物層，最后在結(jié)合物層上電沉積納米金即可。本發(fā)明的生物傳感器可應(yīng)用于檢測目標(biāo)基因，檢測時的先設(shè)計探針，然后修飾捕獲探針，經(jīng)過一、二次雜交和酶催化反應(yīng)后，即可判斷待測雜交液中是否含有目標(biāo)基因及目標(biāo)基因的濃度大小。本發(fā)明的生物傳感器具有導(dǎo)電性好、生物相容性好、靈敏度高、抗干擾性強(qiáng)、選擇性好、制作成本低等優(yōu)點。

1.一種復(fù)合膜修飾的生物傳感器，所述生物傳感器包括有一基體電極，其特征在于：所述基體電極的感應(yīng)端包覆有一芳香族二胺聚合物膜，所述芳香族二胺聚合物膜上修飾有碳納米管-剛果紅結(jié)合物層，所述碳納米管-剛果紅結(jié)合物層上電沉積有納米金顆粒層；所述基體電極為玻碳電極、金電極或鉑電極；所述芳香族二胺聚合物膜是在所述基體電極的感應(yīng)端通過電聚合芳香族二胺單體后得到；所述碳納米管-剛果紅結(jié)合物層是酸處理后帶有羧基基團(tuán)的碳納米管-剛果紅結(jié)合物通過共價鍵牢固結(jié)合在所述芳香族二胺聚合物膜的表面后得到。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合膜修飾的生物傳感器，其特征在于：所述芳香族二胺聚合物的單體為1,?5-萘二胺、1,?8-萘二胺或?qū)Χ被?lián)苯。3.一種如權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合膜修飾的生物傳感器的制備方法，包括以下步驟：（1）材料準(zhǔn)備：準(zhǔn)備一經(jīng)過預(yù)處理的基體電極，并配制碳納米管-剛果紅溶液和氯金酸溶液；所述碳納米管-剛果紅溶液是通過以下方法配制：稱取0.50?g多壁碳納米管粉末，用2.6?M的硝酸溶液回流6?h，再置于2?M的鹽酸中浸泡12?h，使多壁碳納米管酸化并修飾上羧基；然后用超純水反復(fù)清洗除去多余的酸液，3000?rpm離心三次，每次5?min，去除上清液后60℃真空干燥4?h，稱重；將酸化后的多壁碳納米管與剛果紅按5∶1的質(zhì)量比放入研缽中研磨2?h，使二者充分混合，研磨過程中為防止干燥的剛果紅粉末結(jié)塊，需要加入少量超純水；當(dāng)研磨至結(jié)合物略帶綠色時，立即將其置于離心管中，并溶于一定量的超純水，同時蓋緊管蓋震蕩混勻；最后將混合液置于1000?rpm的條件下離心15?min，收集上層黑色溶液，即得到多壁碳納米管-剛果紅溶液；（2）電聚合芳香族二胺單體：以所述的基體電極作為工作電極，在添加有芳香族二胺單體的電解液中建立三電極系統(tǒng)，通過控制掃描電位和掃描速率將芳香族二胺單體電聚合至所述基體電極的感應(yīng)端，形成所述的芳香族二胺聚合物膜；所述電解液為0.1M～0.2?M的HCl溶液；（3）修飾碳納米管：向配制好的碳納米管-剛果紅溶液中滴加活化劑的溶液，再向所述芳香族二胺聚合物膜上滴涂添加了活化劑的碳納米管-剛果紅溶液，自然晾干后在所述芳香族二胺聚合物膜上形成碳納米管-剛果紅結(jié)合物層，得到修飾有碳納米管-剛果紅結(jié)合物層的基體電極；所述活化劑為1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺；（4）電沉積納米金：以上述修飾有碳納米管-剛果紅結(jié)合物層的基體電極作為工作電極，以氯金酸溶液作為電解液，并建立三電極系統(tǒng)，通過控制掃描電位和掃描速率在碳納米管-剛果紅結(jié)合物層上電沉積納米金顆粒，得到基于芳香族二胺聚合物-碳納米管-納米金的復(fù)合膜修飾的生物傳感器。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)合膜修飾的生物傳感器的制備方法，其特征在于：所述電聚合芳香族二胺單體步驟中，所述芳香族二胺單體在電解液中的濃度為10?mM～15?mM。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)合膜修飾的生物傳感器的制備方法，其特征在于：所述電聚合芳香族二胺單體步驟中，所述掃描電位控制在-0.2?V～0.8?V，所述掃描速率控制在40mV·s^-1～60?mV·s^-1。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)合膜修飾的生物傳感器的制備方法，其特征在于：所述修飾碳納米管步驟中，所述碳納米管-剛果紅溶液的濃度為3.0mg/mL～4.0mg/mL，滴加量為4?μL～6μL；所述1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺的溶液的濃度為3?mM～5?mM，所述N-羥基琥珀酰亞胺的溶液的濃度為8?mM～10?mM。7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)合膜修飾的生物傳感器的制備方法，其特征在于：所述電沉積納米金步驟中，所述氯金酸溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%～0.2%，所述掃描電位控制在大于0?V?且在0.9?V以下，所述掃描速率控制在10?mV·s^-1～15?mV·s^-1。8.一種如權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合膜修飾的生物傳感器在檢測目標(biāo)基因中的應(yīng)用，具體包括以下步驟：（1）設(shè)計探針：根據(jù)目標(biāo)基因的序列，利用現(xiàn)有的設(shè)計軟件設(shè)計目標(biāo)基因的捕獲探針和響應(yīng)探針；（2）修飾捕獲探針：在所述捕獲探針的5’端修飾巰基，并將修飾有巰基的捕獲探針滴加到所述復(fù)合膜修飾的生物傳感器的感應(yīng)端進(jìn)行自組裝，然后用巰基己醇封閉剩余的結(jié)合位點；（3）一次雜交：再將修飾捕獲探針后的生物傳感器浸入到待測雜交液中，通過堿基互補(bǔ)配對進(jìn)行一次雜交；（4）修飾響應(yīng)探針：在所述響應(yīng)探針的3’端修飾生物素，并將一次雜交后的生物傳感器浸入到修飾有生物素的響應(yīng)探針溶液中，使其通過堿基互補(bǔ)配對進(jìn)行二次雜交；（5）酶催化反應(yīng)：將二次雜交后的生物傳感器浸入到酶標(biāo)后的鏈霉親和素溶液中，通過酶與其底物的催化反應(yīng)使雜交信號放大，最后根據(jù)雜交信號的大小判斷待測雜交液中是否含有目標(biāo)基因及目標(biāo)基因的濃度大小；所述目標(biāo)基因為木質(zhì)素降解酶的編碼基因；所述的木質(zhì)素降解酶為纖維二糖脫氫酶；所述目標(biāo)基因的目標(biāo)鏈序列為：5’-TTGTTTCCTC?CACTCGCTGT?TTTTTTTTTT?TTTTTTTTTT?TTTTTTTTTT?ACGGGAACTG?CCACTTTGAC?A-?3’；所述目標(biāo)基因的捕獲探針序列為：5’-?TGTCAAAGTG?GCAGTTCCCG?T?-?3’；所述目標(biāo)基因的響應(yīng)探針序列為：5’-?CAGCGAGTGG?AGGAAACAA?-?3’；所述酶為辣根過氧化物酶；所述底物為對苯二酚和過氧化氫溶液。